Лабораторная диагностика бактериальных инфекций

января, 16 2010 8 730 views 0

Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Методы лабораторной диагностики инфекций делят на прямые (определение антигенов или нуклеиновых кислот возбудителя) и непрямые (определение антител к возбудителю).

Основные методы, используемые для лабораторной диагностики бактериальных инфекций, – это прямая микроскопия, культуральный метод, иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Материалом для исследования являются биологические жидкости организма – чаще кровь, моча, ликвор, слизь из зева или носа, вагинальный или шеечный соскоб, соскоб из уретры, реже синовиальная жидкость, слюна.

Прямая микроскопия (на стекле приготавливают мазок из материала и рассматривают его под микроскопом) предварительно позволяет быстро сориентироваться в этиологии патологического процесса.

Культуральный метод (посев материала на среды с последующей идентификацией возбудителя в подросших колониях) является одним из самых точных методов лабораторной диагностики, но для его выполнения требуется значительное время (несколько дней, для выделения туберкулезной палочки – недели). Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале, а также определение его антибиотикорезистентности.

При ИФА определяют находящиеся в биологической жидкости суммарные антитела и/или антигены бактерий путем связывания их со специфическими антигеном/антителом, сорбированными на твердой фазе и меченными ферментом, с последующим расщеплением хромогена и регистрацией результата. Выявляются как суммарные антитела, так и антитела различных классов (IgM, IgG, IgA). Возможно установление титра антител к возбудителю.

При проведении РИФ определяют антигены возбудителя путем связывания их со специфическим антителом, меченным флюоресцентным агентом с последующей детекцией свечения под микроскопом.

Из быстрых тестов для определения бактериальных возбудителей наиболее часто используют реакцию латекс-агглютинации.

ПЦР подразумевает определение нуклеиновых кислот (РНК или ДНК) возбудителя в биологических жидкостях. Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале и определение его генетических характеристик (например, антибиотикорезистентности).

Факторы, влияющие на результаты лабораторных анализов

На результат лабораторного анализа влияют многие факторы, связанные как непосредственно с качеством лабораторной диагностики (диагностическая чувствительность и специфичность метода и используемых тест-систем), так и с правильным выбором метода лабораторной диагностики (исходя из представлений о биологии возбудителя и течения инфекции) и с правильными забором, хранением и транспортировкой материала в лабораторию.

Ошибки лабораторной диагностики

Ошибки

Суть ошибки

Причины ошибки

«Врачебные» Неверно выбранная диагностическая стратегия обследования больного или неправильная интерпретация результатов диагностики Неверные представления о биологии исследуемого инфекционного агента или о возможности метода диагностики
«Лабораторные» Получение ложноположительного или ложноотрицательного результата Нарушение правил забора, хранения и транспортировки проб, или ошибки при исследовании непосредственно в лаборатории

Чувствительность – вероятность получения положительного результата теста у больных пациентов (истинно положительного результата). Рассчитывается как отношение количества людей с истинно положительной реакцией на этот тест при наличии у них какого-либо заболевания к общему числу больных этим заболеванием людей (имеющих и истинно положительные, и ложноотрицательные ответы).

Специфичность – вероятность получения отрицательного результата теста у здоровых пациентов (истинно отрицательного результата). Рассчитывается как отношение количества здоровых людей, у которых имеет место отрицательная реакция на тест к общему числу здоровых людей (имеющих и истинно отрицательные,  и ложно положительные ответы).

Положительная предсказующая ценность – вероятность заболевания в процентах при положительном результате теста.

Отрицательная предсказующая ценность – вероятность отсутствия заболевания при отрицательном результате теста.

Интегральная оценка эффективности диагностики (диагностической чувствительности и специфичности) проводится по ROC-кривой (с вычислением AU ROC и 95% доверительных интервалов к ней).

Особое значение имеет осуществление правильного забора, хранения и транспортировки материала. Наиболее требовательным является культуральный метод – необходима быстрая доставка материала в лабораторию и обязательное сохранение жизнеспособности возбудителя. Для постановки ИФА, ПЦР возможно хранение замороженной плазмы крови. В фиксированном препарате можно проводить микроскопию, в т.ч. флюоресцентную (РИФ).

Ошибки на этапе забора, хранения и транспортировки материала

наименование ошибки

причина ошибки

следствие ошибки

способы

предотвращения

загрязнение пробы на стадии забора материала использование при заборе пробы инструментария, пробирок, перчаток и других материалов, загрязненных посторонней НК ложноположительный результат использование одноразового инструментария и материалов; повышение образовательного уровня медперсонала
загрязнение пробы примесями, ингибирующими ПЦР проба содержит примеси ингибиторов ПЦР (гемоглобин, гепарин и другие) ложноотрицательный результат использование одноразового инструментария и материалов; соблюдение правил забора материала
забор материала выполнен неадекватно несоблюдение правил забора материала (например, вместо соскоба клеток собрана поверхностная слизь) ложноотрицательный результат соблюдение правил забора материала (например, использование специальных щеточек-зондов)
разрушение НК при транспортировке и хранении пробы несоблюдение правил транспортировки и хранения проб ложноотрицательный результат соблюдение правил транспортировки и хранения проб

Достоинства и недостатки различных методов лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Каждый из используемых методов лабораторной диагностики обладает определенными достоинствами и недостатками, и занимает свою нишу в диагностическом процессе. Зачастую для диагностики требуется комбинированное использование нескольких лабораторных методов.

Микроскопия

ИФА

РИФ

Культу-ральный

ПЦР

Что определяет метод непосредственно возбудителя (прямой) антитела или антигены (непрямой) антигены (прямой) непосредственно возбудителя (прямой) нуклеиновую кислоту (прямой)
Сложность проведения метода простой сложный сложный сложный сложный
Быстрота получения результата быстро относительно быстро относительно быстро медленно относительно быстро
Чувствительность низкая высокая удовлетворительная высокая очень высокая
Специфичность низкая удовлетворительная низкая очень высокая очень высокая
Субъективность интерпретации результатов субъективный объективная очень субъективная чаще субъективная объективная
Похожие записи
Добавить комментарий