Для лабораторной диагностики лептоспироза пользуются следующими методами исследования:
- бактериоскопическим
- биологическим
- серологическим
Материал для исследования (табл. 3). В течение первой недели болезни лептоспиры находятся в крови. С 1-го по 5-й день болезни производят посевы крови, заражение лабораторных животных и микроскопию цитратной крови. На 5-15-й день болезни в сыворотках крови больных появляются агглютинины и лизины, которые определяются с помощью РМА. В течение 2-й недели болезни лептоспиры накапливаются в почках и начинают выделяться с мочой. С 10-16-го дня болезни проводят исследование мочи, ликвора, паренхиматозных органов на присутствие лептоспир методом микроскопии.
Лабораторная диагностика лептоспироза. Взятие материала.
| Период болезни | Материал | Метод исследования |
| с 1 по 5-й день | Кровь | Бактериологический (посевы) |
| Кровь с добавлением антикоагулянта* (два объема крови и 1 объем 1,5% р-ра лимоннокислого натрия, смесь отстаивают при комнатной температуре 2 ч.) | Бактериоскопический (микроскопия в темном поле) | |
| на 5-15 день | Сыворотка крови — 0,5 мл
(парные сыворотки с интервалом 7-10 дней) |
Серологическая реакция микроагглютинации (РМА) |
| с 10-16-го дня | Моча (средняя порция), ликвор |
* в этих условиях лептоспиры остаются жизнеспособными до 11 суток.
Оценка диагностической значимости полученных результатов представлена
Оценка диагностической значимости полученных результатов
| Метод | Сроки выдачи результатов, их оценка |
| Бактериоскопический | В тот же день |
| Серологический | На следующий день от момента поступления пробы в лабораторию
В случаях спорадических заболеваний: Обнаружение нарастания титров антител даже в не высоких разведениях (1:10 – 1:100) является абсолютным доказательством наличия заболевания. При вспышках лептоспироза: Достаточно однократного исследования (диагностический титр 1:100 и выше). |
| Бактериологический | При отсутствии роста в течение 3-х месяцев посевы считаются отрицательными. |
Бактериоскопия. Из-за того, что лептоспиры с трудом воспринимают окраску, все наблюдения производят с живыми возбудителями в темном поле. Для исследования готовят препараты «раздавленная капля». Бактериоскопия крови и мочи в темном поле часто дает ошибочные результаты, и в настоящее время ее использование нецелесообразно.
Выделение возбудителя. Для выделения культур лептоспир кровь, мочу, спинномозговую жидкость засеивают в количестве 5-20 капель в 3-5 пробирках с питательной средой (желательно у постели больного) или дистиллированной водой. Самой простой питательной средой является 10% раствор сыворотки кролика в дистиллированной воде с рН 7,2-7,4. Для выявления роста лептоспир через 10 дней от момента посева из каждой пробирки или ампулы готовят препарат «раздавленная капля» и микроскопируют в темном поле. Выделение лептоспир требует до 2 нед., но это важно, так как только таким путем может быть идентифицирован серотип возбудителя. Посев мочи менее надежен.
Биологическая проба. С целью выделения лептоспир с успехом можно использовать введение материала золотистым молодым хомякам, морским свинкам и кроликам сосункам. Наблюдения за зараженными животными не отличаются от таковых за животными, зараженными другими возбудителями.
Серологический метод. Серологический метод диагностики является наиболее простым, общедоступным и быстрым. Как уже упоминалось, агглютинины в сыворотке крови при лептоспирозе обнаруживаются с 3-го-5-го дня болезни. Титры их достигают максимума чаще на 14-17-й день с момента заболевания, а затем постепенно снижаются. Агглютинины в сыворотке крови переболевших лептоспирозом сохраняются длительное время (годами и десятками лет).
Окончательный диагноз лептоспироза ставится при выявлении лептоспир в крови, ликворе или моче, нарастании титра специфических антител в реакции микроагглютинации (РМА) или обнаружении IgM (ИФА на полимерных мембранах).
